BCA(Bicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测,也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量(100μL)的蛋白样品,但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20(v/v),从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便,仅需少量(10-25μL)的蛋白样品。不过,由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8(v/v),某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。
产品特点
1)灵敏度高,最小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/mL(在20~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系)。
2)速度快,比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3)线性范围广,20-1000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。
4) 不受大部分样品中的化学物质的影响, BCA法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂, 可以兼容样品中高达 5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于 10mM ,无EGTA ,二硫苏糖醇低于 1mM; β-巯基乙醇低于 0.01%。
5) Bradford法与BCA法的对比
方法 Bradford法 BCA法
灵敏度 | 1~5 μg | 0.5~20 μg |
时间 | 5~15 min | 40~60 min |
波长 | 595 nm | 562 nm |
检测不同类别蛋白质 | 变异系数较高 | 变异系数较低 |
吸光稳定性 | 1 h内稳定 | 随时间变化 |
手机微信扫一扫联系客服
动态评分
0.0