常规细胞培养需要添加血清来维持细胞的增殖能力,尽管血清可以满足一般细胞培养需求, 但在进行营养成分优化和标记特定成分进行研究的实验中,仍需要去除某些特定的成分,常 用的去除方法有透析。透析是将血清循环通过中空纤维,并在血清中补充生理盐水以维持渗 透压,移除分子量小于 10,000MW 的小分子,如氨基酸、葡萄糖、盐离子和未结合的蛋白 等。 血清通常用作细胞生长的添加物,拥有多种功能和用途,如:富含大分子蛋白,低分子量的 营养素,作为氨基酸、碳水化合物、维生素的额外来源;提高介质的缓冲能力;可结合或中 和有毒成分;减少细胞氧化应激,减少细胞凋亡;提供促进生长的因子,有助细胞适应培养 环境。
【适用范围】 可用于研究蛋白质组学、同位素标记、细胞信号传导和报告基因分析等。
【使用方法】 血清从冰冻区中取出后(切勿直接将血清从-20℃进入 37℃解冻,这样因温度改变太大,容 易造成蛋白质凝集而出现沉淀),置于 2℃~8℃中使之融化,解冻过程中间歇地轻轻摇晃 均匀,待全部溶解后再分装或直接使用。完全融解的血清从 4℃拿出,按要求比例(5%-20%) 加基础培养基配置成完全培养基,建议其置于 4℃冰箱存放并于 1-2 周内用完。
【储存条件及保质期】 应贮存在-10℃~-20℃,避免反复冻融; 有效期为 5 年。
【注意事项】 血清沉淀的物质主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),脂蛋白,冷凝集素,玻连蛋白,胎球蛋白, 磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。 哪些原因容易导致血清沉淀: 1. 温度改变太大,血清由-20℃直接放入 37℃解冻,因温度改变剧烈容易导致沉淀。 2. 血清在室温或 4℃冰箱放置时间太久,血清中的不稳定成分会被破坏,影响细胞生 长效果;导致血清品质变差,也会产生沉淀。 3. 血清分装冻存时,注意在不产生气泡的情况下摇晃均匀,避免因血清成分浓度改变 产生沉淀。 4. 血清灭活后容易产生沉淀,如需使用灭活血清,请按 56℃,30 分钟,轻微摇晃原 则操作,灭活温度过高、时间过长、摇晃不均都容易产生沉淀。 5. 如有血清沉淀,分装后进行离心处理,建议 400g 离心 5 分钟,取上清使用。
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