脂肪酶（Lipase，LPS）活性试剂盒说明书 分光光度法 50 管/48 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的 存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。 测定原理： LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。 组成： 产品名称 FA013-50T/48S Storage 试剂一：液体 90ml 4℃ 试剂二：液体 14ml 4℃ 试剂三：甲苯（自备） 100ml 4℃ 试剂四：液体 20ml 4℃ 标准品：液体 10μl 4℃ 说明书 一份 试剂二：液体 14ml×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。 标准品：液体 10μl×1 瓶，10 µmol/ml 的标准溶液，4℃保存。临用前加入 3.168 ml 甲苯，充分溶解。 自备仪器和用品： 研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯 100ml、 冰和蒸馏水。 粗酶液提取： 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂 一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加 入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体: 直接检测。

LPS 活性计算公式： 1. 组织、细菌或细胞 LPS 活性 （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（Cpr×V 样） ÷T =16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷Cpr （2）按照样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (μmol/min/g 鲜重) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T =16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷W （3）按照细菌或者细胞数量计算 活性单位定义：37℃中每 10 4个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (μmol /min/10 4cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T =16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]÷细胞数量 2. 血清等液体 LPS 活性 活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (μmol /min/ml) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）]×V 反总÷V 样÷T=16×[(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管- A 空白管）] C 标准品：10 µmol/ml；V 反总：反应总体积，2ml；V 样：反应中加入样本体积，0.125ml；V 样总：加 入提取液体积，1ml；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/ml，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量 测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。