谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒

Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH

产品说明：

谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒用于对组织提取物中的谷胱甘肽过氧化物酶进行定量检测。本试剂盒基于谷胱甘肽（GSH）氧化后可生成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。利用谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）将GSH氧化成GSSG，生成的GSSG在谷胱甘肽还原酶（GR）的催化下再次生成GSH以NADP+NAPDH氧化为NADP+的过程伴随340 nm处吸收光的减少。此处吸收值减少与样本中谷胱甘肽过氧化酶活性呈正相关。绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

      本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx的活力在5-30分钟内进行调整。

      本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

     谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)可以催化GSH产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH，通过在A340检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中，谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。

    本试剂盒利用了如下的反应原理，GPx为谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase)，GR为谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)，R-OOH为过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶细胞活性测定试剂盒用于测定组织提取物中的谷胱甘肽过氧化物酶。该测定基于将谷胱甘（GSH）氧化为氧化型谷胱甘肽（GSSG）。这一反应由GPx催化，并用谷胱甘肽还原酶和NADPH将GSSG再循环回GSH。由于该酶是偶联反应的限速因子，因此在NADPH氧化成NADP的过程中，可通过测定340nm处NADPH吸光度的降低，表明谷胱甘肽过氧化物酶的活性。

本试剂盒提供的有机过氧化物试剂(t-Bu-OOH)在没有谷胱甘肽过氧化物酶存在的情况下不会和GSH产生反应，也不会被细胞内的过氧化氢酶催化而分解。因而可以较为特异地检测出谷胱甘肽过氧化物酶的活力。

由于t-Bu-OOH不能被不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶所催化，所以本试剂盒可以比较特异地定量检测最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒可检测组织匀浆产物、细胞裂解产物等样品中谷胱甘肽过氧化物酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。