Western Blot 快速封闭液相比于传统封闭液不含有蛋白质和非离子洗涤剂,避免了免疫活性污染物和洗涤剂残留对目的信号的干扰。封闭时间仅需室温5-10分钟即可获得更高的信号和更低的背景。主要应用于Western Blot实验中对转移完成后的PVDF膜和NC膜的封闭。
产品特点:
●即用型,使用便捷。产品效期长,可在2-8°C保存一年。
●相比于传统封闭液封闭时间短,仅需10分钟。
●目的信号强、背景低、相比传统封闭液有着极高的信噪比。
●同时还能起到稳定抗体活性的效果。
使用方法:
1. 完成转膜后使用洗涤液快速清洗膜1-2遍。将膜沥干洗涤液后,转移到合适大小的容器中,加入一定体积Western Blot 快速封闭液(对于尺寸为7 cm x 9 cm的转移膜,推荐使用20 mL左右的封闭液),确保封闭液能够完全浸没膜。
2. 将容器放置在水平摇床上,室温(25℃)震荡孵育10分钟。
3. 封闭完使用洗涤液清洗1遍,即可进行Western blot后续的一抗孵育。
注意事项:
1. 该封闭液也可能存在一些不适用的实验体系,因此对于一些特殊的实验或抗体效果不能达到预期的,可以考虑用更适宜的封闭体系来进行实验;。
2. 信号弱或者无信号:
a.目的蛋白样品上样量过少或者抗体浓度过低,可加大上样量或者增加一抗工作抗体浓度;
b.抗体效价低,特异性差等原因造成,需要根据实验情况进行调整。
3. 背景高:
a.抗体使用量过多或者蛋白上样量过大会导致大量的非特异性条带出现;
解决方案:降低蛋白上样量或者抗体浓度即可避免。
b.转印膜的洗涤时间次数过少或者时间过短;
解决方案:补充 TBST 洗涤次数与洗涤膜的时间。
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